纯化技术

源兴基因具有基因重组病毒纯化平台,可纯化多种类型病毒,包括腺病毒、痘病毒、慢病毒、疱疹病毒、腺相关病毒、新城疫病毒等。纯化规模适配病毒培养规模,最大可完成200L规模反应器的收获液的纯化,获得保持高病毒活性、高纯度、高浓度的符合药品质量标准要求的重组病毒产品,可用于基础研究、临床前研究及临床研究。
纯化的主要操作有澄清、超滤浓缩、层析等。
  • 澄清

    细胞收获液的澄清是生物制药工艺中下游纯化的第一步, 目的是有效分离收获液中的细胞、细胞碎片和目的病毒,通常使用离心、过滤或切向流技术。根据不同的实验设计可以选择不同的澄清方式。
  • 离心

    利用离心力,分离液体与固体颗粒或液体与液体混合物中各组分的方法,生物制品常采用高速冷冻离心机进行初级分离纯化。
    我司使用Avanti J-26S XP离心机连续流离心去除细胞碎片等大颗粒杂质或超速离心浓缩收集病毒。
  • 过滤

    预过滤是生物制药领域去除颗粒杂质和减少生物负荷的常用方法。澄清过滤能够通过大小排阻和电荷吸附的作用,有效的除去大粒径颗粒物,从而可以大大增加下游终端膜过滤的通量,使整个过滤系统运行更加经济可靠。
    过滤有效成分损失极少,产品无形态变化,无化学变化,处理规模大,效率高。
    我们选用非特异性吸附、高产品收率的抛弃式滤芯或是深层过滤器,去除杂质,生物安全性高,无批次间残留。
  • 超滤

    超滤是一种加压膜分离技术,即在一定的压力下,使小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的特制的薄膜,而大分子溶质不能透过,留在膜的一边,从而使大分子物质得到了部分的纯化。
    超滤膜的孔径小于0.1μm,可根据需要选择孔径大小,具有高效率、低能耗的分离特点。在病毒纯化中,可去除一些小分子杂质,同时浓缩病毒收获液。
    我司拥有AKTA flux6和uniflux 30超滤系统,根据不同的处理体积,选择相应的切向流超滤系统,剪切力低、通量高,产品活性回收率高、处理量大。
  • 层析

    我司拥有AKTA pure和AKTA pilot纯化系统,可进行不同规模的柱层析纯化。
    我司采用柱层析纯化的方法纯化病毒,主要包括离子交换层析、凝胶层析、复合模式层析,过程中不产生热,不产生外力,高回收率,高分辨率,可线性放大,可自动化,并有大量成功案例。
    离子交换层析是以离子交换剂为固定相,依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。在腺病毒纯化中,根据不同的病毒类型,将多种填料Source 30Q,Q Sepharose XL,Fractogel DEAE,Capto Q等分别应用。
    凝胶层析是按照蛋白质分子量大小进行分离的技术,又称分子筛过滤、排阻层析等。它的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体,不带电荷,吸附力弱,操作条件比较温和,不需要有机溶剂,并且对分离成分理化性质的保持有独到之处。对于高分子物质有很好的分离效果。
    复合模式层析是指具有大小分离以及吸附层析双重功能的层析方式。典型的复合模式层析填料Capto Core 700设计用于病毒和其他生物大分子的纯化。Capto Core 700 由激活的配基核心和惰性壳层组成。惰性壳层可以排阻大分子(排阻分子量~Mr,700000[700kDa]),阻止其经壳层上的孔进入核心。这些大分子在柱流穿中被收集起来同时,较小的杂质会与微球内在辛胺配基结合。这些特点使 Capto Core 700 成为了疫苗生产中病毒纯化最后阶段典型使用的分子排阻层析介质的极佳替代方案。